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實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介： 

體外神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)已成為神經(jīng)生物學(xué)研究中十分有用的技術(shù)手段。 

神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的主要優(yōu)點(diǎn):

(1)分散培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞在體外生長(zhǎng)成熟后,能保持結(jié)構(gòu)和功能上的某些特點(diǎn), 而且長(zhǎng)期培養(yǎng)能形成髓鞘和建立突觸聯(lián)系,這就提供了體內(nèi)生長(zhǎng)過(guò)程在體外重現(xiàn)的機(jī)會(huì)。 

(2)能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)直接觀察活細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、形態(tài)和功能變化,便于使用各種不同的技術(shù)方法如相差顯微鏡、熒光顯 微鏡、電子顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、同位素標(biāo)記、原位雜交、免疫組化和電生理等手段進(jìn)行研究。 

(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化學(xué)和生物因子（如 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子）等實(shí)驗(yàn)條件, 觀察條件變更對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的直接或間接作用。 

(4)便于從細(xì)胞和分子水平探討某些神經(jīng)疾病的發(fā)病機(jī)制，藥物或各種因素對(duì)胚胎或新生動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞在生長(zhǎng)、發(fā)育和分化等各方面的影響。 

一、液體配制：

硼酸硼砂緩沖液：0.05M四硼化鈉45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

胰酶－EDTA消化液： 胰酶－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡鹽液定容至100ml。

所用的培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶或玻片預(yù)先經(jīng) 100μg/L多聚賴氨酸硼酸鹽緩沖液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干備用。 

二、操作步驟如下： 

1、出生2 d SD大鼠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開(kāi)皮膚、肌肉、皮下筋膜，無(wú)菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的D-Hanks平衡鹽液中。 

2、在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱內(nèi)消化20min，中間搖晃一次。 

3、隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液（DMEM＋10％FBS）的離心管內(nèi)終止消化液作用 5min。 

4、用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的DMEM＋10％FBS的離心管內(nèi)，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次，靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟2～3次。 

5、將所收集的上清經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾。 

6、過(guò)濾后的細(xì)胞懸液于800r/min離心5min，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液（DMEM＋20％FBS）并吹打成單細(xì)胞懸液。 

7、細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度按1.5×105/cm2種入6孔板內(nèi)，放入CO2孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48h后換液并加入 Ara-C使其終濃度為1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量換液。以后每隔3天半量換液一次。 

三、無(wú)菌操作的注意事項(xiàng)：

細(xì)胞原代培養(yǎng)一定要保持工作區(qū)的無(wú)菌清潔，先用紫外燈殺菌1h，操作前用75%乙醇消毒，穿上實(shí)驗(yàn)服，戴上口罩和帽子，操作時(shí)不能大聲說(shuō)話，雙手戴上一次性橡膠手套，整個(gè)無(wú)菌操作都應(yīng)該在酒精燈的周圍進(jìn)行。 

四、服務(wù)流程： 

1、 討論分析實(shí)驗(yàn)方案 

2、 確定服務(wù)內(nèi)容 

3、 簽訂服務(wù)合同 

4、 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，定期向客戶反饋 

5、 整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告 

6、 完成合同內(nèi)容 

7、 后續(xù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)，進(jìn)一步合作

五、細(xì)胞服務(wù)項(xiàng)目： 

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果： 

歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。 

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