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實(shí)驗(yàn)操作流程： 

成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液配備與誘導(dǎo)操作： 

1、準(zhǔn)備含10%FBS的α-MEM培養(yǎng)液； 

2、在備好的α-MEM培養(yǎng)液中添加50μM 抗壞血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松； 

3、準(zhǔn)備6孔培養(yǎng)板，將P4細(xì)胞按照5×103個(gè)/平方厘米的規(guī)格接種于原始α-MEM培養(yǎng)液中； 

4、待細(xì)胞長(zhǎng)至基本融合后，更換上述制備完成的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液； 

5、每三天換液一次，細(xì)胞長(zhǎng)至7天時(shí)進(jìn)行堿性磷酸酶染色； 

6、二十八天后再進(jìn)行礦化結(jié)節(jié)的茜素紅染色。 

素紅染色方法介紹： 

1、去除細(xì)胞當(dāng)前使用培養(yǎng)液，使用PBS清洗兩次； 

2、使用10%甲醛室溫固定15分鐘，完成后使用重蒸餾水沖洗兩次； 

3、按照1ml/孔加入40mM的茜素紅染色液，室溫孵育20min并輕微振蕩； 

4、清除掉沒(méi)有完全結(jié)合的染料，用重蒸餾水漂洗并振蕩5min重復(fù)4次； 

5、傾斜放置2min,吸取多余的重蒸餾水；倒置顯微鏡觀察拍照記錄。

成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液配備與誘導(dǎo)操作： 

1、配置FBS10%含量的HG-DMEM培養(yǎng)液； 

2、在配制完成的HG-DMEM培養(yǎng)液中加入1μM地塞米松,10μg/ml胰島素，200μM吲哚美辛和0.5mM IBMX； 

3、準(zhǔn)備6孔培養(yǎng)板，將P4細(xì)胞按照2×104個(gè)/平方厘米的規(guī)格接種于原始HG-DMEM培養(yǎng)液中 

4、待細(xì)胞長(zhǎng)至基本融合后，更換上述制備完成的成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)2天，在用只含有10μg/ml胰島素的 成脂維持培養(yǎng)液培養(yǎng)1天，如此交替循環(huán)培養(yǎng)至14天，使用紅油O染色。 紅油O染色方法介紹：

1、去除細(xì)胞使用的當(dāng)前培養(yǎng)液，使用PBS清洗兩次； 

2、27.5%甲醛室溫固定20分鐘； 

3、重蒸餾水清洗3此，空氣中干燥； 

4、加入0.5%的紅油室溫孵育一小時(shí)； 

5、配制70%乙醇溶液清洗3次； 

6、倒置顯微鏡觀察拍照記錄。 

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)： 

客戶提供： 細(xì)胞種類和誘導(dǎo)分化細(xì)胞類型。 

交付標(biāo)準(zhǔn)：

1、成功定向誘導(dǎo)分化的細(xì)胞。 

2、完整項(xiàng)目報(bào)告（材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。  

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果： 

歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。 

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