顯示DNA的傳統(tǒng)方法是富爾根(Feulgen)反應(yīng),切片先用稀鹽酸處理,DNA經(jīng)弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃條件 下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開,脫氧核糖的一端釋放出醛基,并在原位與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn) 物。 原理同PAS反應(yīng),使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響,故染色具有DNA特異性。準確的溫度和鹽酸濃度, 適宜的水解時間是成功的關(guān)鍵。水解過度或不足均降低染色強度。
配制試劑:
1.1mol/L HCL:將8.5ml濃鹽酸和91.5ml蒸餾水混合即得;
2.0.5%亮綠水溶液;
染色步驟:
1.取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細胞,用Hanks液漂洗三次;
2.在卡諾(Carnoy)固定液中固定10min,然后蒸餾水洗三次;
3.移入60℃濃度為1mol/L的HCL中靜置10min;
4.用蒸餾水漂洗幾次;
5.放入Schiff試劑中靜置30—60min,可隨時檢查顯色情況;
6.用自來水沖洗5min;
7.再用蒸餾水漂洗;
8.不同濃度梯度乙醇溶液脫水;
9.用二甲苯透明、樹膠封片; 結(jié)果: 原代細胞核內(nèi)DNA顯紫紅色,細胞質(zhì)呈綠色。
結(jié)果展示:
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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