線粒體膜電位檢測
1. 線粒體膜電位：是維持線粒體進行氧化磷酸化、產(chǎn)生三磷酸腺苷的先決條件, 膜電位的穩(wěn)定有利于維持細胞的正常生理功能。
2. 檢測方法：JC-1熒光探針法（熒光顯微鏡觀察）、流式檢測
線粒體跨膜電位DYmt的下降，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中最早發(fā)生的事件，它發(fā)生在細胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6
（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強或減弱說明線粒體內(nèi)膜電負性的增高或降低。
一、方法
將正常培養(yǎng)的細胞和誘導凋亡的細胞加入使用終濃度為Rhodamine 123（1mM）或終濃度為DiOC6（25nM），JC-1 （1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式細胞計檢測細胞的熒光強度。
二、注意事項
1、始終保持平衡染液中pH值的一致性，因為pH值的變化將影響膜電位。
2、與染料達到平衡的細胞懸液中如果含有蛋白，他們將與部分染料結(jié)合，降低染料的濃度，引起假去極化。 熒光探針JC-1是一種陽離子型的親脂性染料，能夠自由穿過細胞膜，隨細胞膜電位的變化而在膜兩側(cè)保持動態(tài)平衡。其特點是線粒體膜電位低時濃度低，主要以單體形式存在，488nm激發(fā)時最大發(fā)射波長為527nm，呈綠色熒光，胞漿相對線粒體為低電位，形成流式圖中所有細胞FL1均為陽性；膜電位高時濃度高形成聚集體，488nm激發(fā)時的最大發(fā)射波長為590nm，紅色熒光。活細胞線粒體膜電位高，線粒體內(nèi)JC-1聚集體的濃度高，紅色熒光很強，在流式圖上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性，而凋亡細胞則大多為FL1單陽性。
線粒體膜電位檢測-流式法
線粒體膜電位檢測-免疫熒光法
結(jié)果展示
JC-1熒光探針法（熒光顯微鏡觀察
流式檢測線粒體膜電位
實驗周期及交付標準
1. 實驗周期：2-3周
2. 交付標準： 熒光顯微鏡拍照：熒光圖、熒光比值、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器） 流式檢測：流式檢測圖、比值、原始數(shù)據(jù)、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器）
需確認的信息
1. 樣本的種屬及類型（組織還是細胞）
2. 樣本數(shù)量
3. 是否提供探針
4. 拍照要求、分析要求
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
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