實驗操作流程：
成骨誘導培養液配備與誘導操作：
1、準備含10%FBS的α-MEM培養液；
2、在備好的α-MEM培養液中添加50μM 抗壞血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松；
3、準備6孔培養板，將P4細胞按照5×103個/平方厘米的規格接種于原始α-MEM培養液中；
4、待細胞長至基本融合后，更換上述制備完成的成骨誘導培養液；
5、每三天換液一次，細胞長至7天時進行堿性磷酸酶染色；
6、二十八天后再進行礦化結節的茜素紅染色。
素紅染色方法介紹：
1、去除細胞當前使用培養液，使用PBS清洗兩次；
2、使用10%甲醛室溫固定15分鐘，完成后使用重蒸餾水沖洗兩次；
3、按照1ml/孔加入40mM的茜素紅染色液，室溫孵育20min并輕微振蕩；
4、清除掉沒有完全結合的染料，用重蒸餾水漂洗并振蕩5min重復4次；
5、傾斜放置2min,吸取多余的重蒸餾水；倒置顯微鏡觀察拍照記錄。
成脂誘導培養液配備與誘導操作：
1、配置FBS10%含量的HG-DMEM培養液；
2、在配制完成的HG-DMEM培養液中加入1μM地塞米松,10μg/ml胰島素，200μM吲哚美辛和0.5mM IBMX；
3、準備6孔培養板，將P4細胞按照2×104個/平方厘米的規格接種于原始HG-DMEM培養液中；
4、待細胞長至基本融合后，更換上述制備完成的成脂誘導培養液培養2天，在用只含有10μg/ml胰島素的成脂維持培養液培養1天，如此交替循環培養至14天，使用紅油O染色。
紅油O染色方法介紹：
1、去除細胞使用的當前培養液，使用PBS清洗兩次；
2、27.5%甲醛室溫固定20分鐘；
3、重蒸餾水清洗3此，空氣中干燥；
4、加入0.5%的紅油室溫孵育一小時；
5、配制70%乙醇溶液清洗3次；
6、倒置顯微鏡觀察拍照記錄。
實驗注意事項：
交付標準：
1、成功定向誘導分化的細胞。
2、完整項目報告（材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果）。
客戶提供：細胞種類和誘導分化細胞類型、生長良好的細胞，也可交由星森林代購。
需確認的信息
1. 細胞樣品是否需要進行處理以及樣品的分組情況？
2. 客戶是否需要我方提供免疫熒光抗體和生物學功能檢測試劑盒？
收費標準/服務周期/提供結果：
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