實(shí)驗技術(shù)簡介:
Franna Nissl (1860-1919) 1892年創(chuàng)立了Nissl染色法,以發(fā)現(xiàn)Nissl小體和Nissl變性而聞名。常用的堿性染 料有Cresyl violet (焦油紫,甲.酚紫,克紫);thionine (硫荲);tolridine blue (甲苯.胺藍(lán))等。 尼氏體為嗜堿性物質(zhì),又稱嗜染質(zhì),光鏡 下呈斑塊狀或細(xì)粒狀散在均勻分布。在一些大型的運(yùn)動神經(jīng)元, 尼氏體大而多,宛如虎皮花紋,又稱“虎斑”。電鏡下,尼氏體由大量平行排列的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和其間 的游離 核糖體組成。尼氏體是神經(jīng)元胞體細(xì)胞質(zhì)的特征性結(jié)構(gòu)之一,神經(jīng)元胞質(zhì)另外一特征性結(jié)構(gòu)為神經(jīng)原纖維。
技術(shù)原理:
正常的神經(jīng)細(xì)胞都含有一定數(shù)量的尼氏體,它們主要分布于神經(jīng)細(xì)胞 的漿中,形狀有大有小,如三角形, 有的為橢圓形。這些物質(zhì)能被大部分的藍(lán)色染料所染色,這些染料如焦油堅牢紫(Cresyl fast violet)亞 甲藍(lán)(methylene blue)甲苯.胺藍(lán)(toluidine blue)硫董(thionin)等鈄其染為藍(lán)色。但是,當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞 受傷后,胞質(zhì)內(nèi) 的尼氏體更可發(fā)生變化,嚴(yán)重的可消失。
實(shí)驗操作流程:
1、切片脫蠟至水
2、用焦油堅牢紫水溶液浸染20-30分鐘
3、水洗
4、用95%酒精分化
5、無.水.酒.精脫水,二甲苯透明,中性樹膠
實(shí)驗結(jié)果:
神經(jīng)細(xì)胞單位:
紫-藍(lán)色 細(xì)胞核:紫-藍(lán)色 尼氏體:紫-深藍(lán)色
結(jié)果展示
神經(jīng)元尼氏(nissl)染色
客戶提供:
1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存,組織不少于100mg;
2、培養(yǎng)細(xì)胞:通過細(xì)胞計數(shù)取不少于2×106個細(xì)胞于EP管,加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,混勻后保 存于冰箱(-80℃,避免反復(fù)凍融);
3、血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑, 保存(-80℃可長期保存,避免反復(fù)凍融);
4、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可長期保 存,避免反復(fù)凍融);
5、石蠟切片,冰凍切片以及細(xì)胞爬片,涂片等。
6、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本 組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后,加冰袋寄送; 細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出); 血清或上清液直接加冰袋寄送(送視路程遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá))。
交付標(biāo)準(zhǔn):
1、圖片;
2、完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗結(jié)果)。
其他:
應(yīng)用酒精分化切片,要迅速,防止過度分化,將切片上的顏色全部脫掉