規(guī)格: 切片 β-半乳糖苷酶是一種常用的報告基因分子,通過原位染色,在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以用于檢測到β-半乳糖苷酶的表達(dá)。
實驗步驟:
1.用 2 mL D-PBSA 液洗滌細(xì)胞(如在 6 孔培養(yǎng)板上)。
2.用 1 mL 固定液于室溫下固定細(xì)胞 5 min。
3.用 2 mL D-PBSA 洗滌細(xì)胞 2 次。
4.將 1 mL 底物/染色液加入到每個培養(yǎng)孔內(nèi),37℃ 孵育 2 h。
5.用 2 mL D-PBSA 液沖洗每孔細(xì)胞,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞,計數(shù)藍(lán)染(β-gal 陽性)細(xì)胞。
6. 培養(yǎng)板的儲存。在每孔加 1 mL 含 10% 甲醛的緩沖鹽溶液,室溫下固定 10 min,然后用緩沖鹽溶液洗滌細(xì)胞,4℃ 儲存 緩沖鹽溶液。
結(jié)果展示:
被β半乳糖苷酶法染色的衰老細(xì)胞
注意事項:
1. β-Gal Fixative有一定的腐蝕性和氣味,操作時請注意防護(hù)。
2.β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件,不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱 中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值,而導(dǎo)致染色失敗。
3. 配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色時 可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進(jìn)行,例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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